Језик :
SWEWE Члан :Пријава |Регистрација
Претражи
Енциклопедија заједница |Енциклопедија Одговори |Пошаљи питање |Речник Знање |Додај знања
Претходна 1 Следећи Изаберите Странице

Флуоресценција ин ситу хибридизација

Флуоресценција ин ситу хибридизација

Кратак увод

Флуоресценција ин ситу хибридизација је метод физичка карта цртеж метода, користећи флуоресцински-означену као сонду за откривање и истрагу метафази хромозома или међуфаза хроматина хибридизације.

Флуоресценција ин ситу хибридизација (флуоресцентна ин ситу хибридизација, риба) крајем 1980-их, радиоактивни ин ситу хибридизација технике развијене на основу не-радиоактивног цитогенетических молекуларних техника за замену флуоресцентни маркер формирана исотопицалли означен Нове врсте у ситу хибридизација, сонда повезана са првом молекул-посредована (новинар молекула) са хибридним процесом затим преко везе иммуноцитоцхемистри флуоресцентну боју риба основни принцип. се ДНК (или РНК) сонди са специфични нуклеотида молекуларни маркери, и хибридизацијом сонде директно у хромозома или кришке влакана ДНК, а затим са флуоресцински-коњугованих молекула моноклонских антитела сонди открити одређени обавезујући низ молекул ДНК или хромозомске ДНК влакана кришка квалитативне, позиционирање, релативна квантитативна анализа. РИБА је сигуран, брз, висока осетљивост, сонда може да се складишти на дуже време може да прикаже различите боје, итд, не само да може да прикаже метафази, већ приказан у интерфазним језгру. а на основу флуоресценције у ситу хибридизација и развој мулти-колор флуоресценције ин ситу хибридизација и хроматина влакана флуоресценције у ситу хибридизација.Примена позадина

РРНК за коришћење флуоресценције ин ситу хибридизација, следећи узроци могу довести до нижег интензитета флуоресценције сигнала:

ЦОНТЕНТ ниже рибозома

Доњи пропустљивост околних ћелија

Циљ редослед може бити мањи контакт (због савијање на рРНК усаглашености, неког другог положаја и рРНК молекул протеина или ланац или другог рРНК блиског контакта, тако да сонда и циљна секвенца може хибридизација)

Да би тестирали да ли редослед циљне ћелије је лако хибридизације, а оптимална хибридизација температура тест може да се користи за "клонирање флуоресценције ин ситу хибридизација" (клон-ФИСХ) Тест: рРНК гена уграђен у плазмид је претворена Есцхерицхиа цоли израз представља рибозома, а затим флуоресцентли означене сонде.

Рибе могу се комбиновати са протока цитометрију, флуоресцентне носе ознаку специфичног зрнаца или одвајања. [1]

Варијанте

Ензим-линкед флуоресцентна ин ситу хибридизација (ФИСХ ЦАРД-)

Флуоресцентни ин ситу хибридизација (ФИСХ) технике детаљне

1974 ће бити први пут Еванс хромозом технике савијања и ин ситу хибридизација у комбинацији, побољшати тачност позиционирања. Крајем 1970-их, људи су почели да истражују флуоресцентна ин ситу хибридизација, односно РИБА технологије. 1981 Харпер успео у једном копирања ДНК циљају на Г-бандинг узорака, обележавање локација хромозомске технологија је значајно напредовала. Током 1990-их, уз вођење људског генома, јер високе резолуције мапирање људског генома потребама, РИБЕ технологија је брз развој и широка примена.

Принцип

ФИСХ (флуоресцентна ин ситу хибридизација) техника је важан нису радиоактивни ин ситу хибридизација. Његов основни принцип је: да ли откривен кришке хромозом или влакна ДНК уз употребу циљне ДНК је хомологан а нуклеинске киселине комплементарним сонде, две денатурисани - жарење - ренатуратион може се формирати са циљном нуклеинске киселине ДНК пробе хибрид. Нуклеинских киселина сонда извештај о конкретној нуклеотида степена молекула, као што су биотина, дигоксина, могу користити извештај флуоресцински-ознаком молекули са авидин између одређених имунохемијским реакције, флуоресценција пожара у огледалу ДНК која се мери у квалитативном, квантитативном или релативна позиционирања анализе.

Експериментална процедура

РИБА припрема узорка → → Припрема пробе хибридизације сонде означени → → (трака хромозом) → → резултати флуоресцентни микроскоп анализа.

Одлика

Ин ситу хибридизација сонди подељен врсти маркера молекула радиолабелед и нису радиоактивни означавање. Означене радиоактивног изотопа предност сонде за мање захтевне на припрему узорака, можете продужити време експозиције да побољша јачину сигнала, то је осетљивије. Мана је да је сонда је нестабилна, ауторадиограпхи дуго времена, радијација расејање чини просторна резолуција није висока, а изотопи рад компликованије и тако даље. Флуоресцентна систем означавања може да се користи за превазилажење ових недостатака, ово је риба техника. РИБА техника као не-радиоактивног детекцију система има следеће карактеристике.

Предности: 1, флуоресцентне реагенси и сонде економске, безбедносне, 2, сонда стабилност, знак у року од две године након употребе, 3, кратки експериментални рок, могу брзо добити резултате, специфичност, тачно позиционирање, 4, риба може налази у 1кб дужине ДНК, осетљивост радиоактивних сонди значајне, 5, шарен риба у истом језгру, преко различитих боја може бити приказана истовремено детектује више редослед, 6, или у слајдова, или броја хромозома метафази промене у структури може бити приказана у суспензије интерфазним структуре ДНК хромозома.

Недостаци: не достигне 100% хибридизација, посебно у примени кратком цДНА сонде значајно смањује ефикасност.

Апликација

Технологија не само да може да се користи у низу познатих гена или хромозома местом, али такође може да се користи за клонирање гена или генетских маркера није и цепање хромозома студије. У гена квалитативном, квантитативном, интеграција, и други аспекти истраживања изразили знатну предност.

РИБА првобитно коришћени за метафази хромозоми. Разликује од припрема у овом језгру је веома сажете хромозома, сваки хромозом има препознатљиву форму, они ће показати карактеристичну Бојење центромерне положаја и боје у бенд типа. Када је реч о метафази хромозома, риба добија мерењем флуоресценције сигнал у односу на положај краја кратком краку хромозома (ФЛптер вредност) да се приказати. Метафази хромозоми користе недостатке који, будући да је природа њеног веома кондензоване, само ниске резолуције мапирање, најмање два одвојена маркера на 1МБ хибридизације сигнала као посебан другачија (Треск ет ал., 1991) . Ова резолуција није довољна да се изгради хромозом мапе размене. Зато метафаза хромозом РИБА се углавном користи за идентификацију нових маркера на хромозомима приближну локацију, за друге софистицираније методе мапирања за припрему. Све заједно, ове "друге методе" не укључује било који од рибе, али после 1995, серија високе резолуције РИБА технике је развијен. Ове технологије се проучавати варирањем природу припрему хромозома за постизање веће резолуције. Хромозоми Метапхасе згуснути за фину мапирање превисока, тако да морају да користе више хромозома протежу. Постоје два начина да испуњавају овај услов (Хеисканен и остали, 1996.): Механичка Стретцх хромозома (механички протезао хромозом) променом медијума за језгро добијени методом хромозома. Маказе центрифугална сила може да се протезао на нормалну дужину од 20 хромозома. Сваки хромозом се још увек може идентификовати зависи риба методама сигнала мапирање обично баве истим метафази хромозома, тако да резолуција може значајно побољшати, могу разликовати осим 200 ~ 300кб траг. Собе метафази хромозоми (не-метафаза хромозом) само у средином висине кондензоване хромозома, док остале фазе ћелијског циклуса у одржавању природног стања не пакује, истраживачи су користили пре језгро, хромозом кондензације довољно времена да разликују појединачне хромозома. У пракси, овај метод није супериоран у односу на механичке протежу место хромозома. Насупрот интерфазним (међуфазна) хромозома су више корисна јер Интерпхасе (нуклеарна подела међу опет) најнижи ниво хромозома паковања. Користите хромозома међуфаза, резолуција може достићи 25кб или мање, али морфологија хромозома нестао, позиционирање сонде позицију за промовисање потребе за спољним референтне тачке. Дакле, технологија може бити грубо мапирање хромозом се користи после, обично као малом простору да одреди хромозомски редослед низа маркера. Интерфазним хромозоми садрже све ћелије на збору ДНК молекула. Да би додатно побољшати резолуцију рибе на 25кб или мање, потребно је дати комплетан хромозом, коришћење пречишћених ДНК. Овај метод се зове фибер-РИБА (фибер-РИБА), користећи молекуларне чешља Гел технологија за припрему протезао или ДНК, може да разликује растојање маркера мањи од 10кб. [2]

Флуоресценција ин ситу хибридизација процесу технолошки развој

РИБЕ да открије број сајтова и развој циљне детекције

Након ФИСХ техника у основи успостављен, риба је не само за један ген или нуклеинских киселина детекције, РИБА технологија обухвата и даљи развој вишебојној РИБА истовремену детекцију више генских локуса, од развоја генетског тестирања у геном, хромозому, у живим ћелијама изворни текст иРНК битни за откривање и детекцију нуклеинских киселина ниво организације, а у будућим студијама могу се применити и на откривању целог организма. Рани сонде већа пролиферација превозник, Ник превод метод, ин витро методом транскрипције и случајни прајмер начин припремити синтезу ДНК да добију одређену клонирање хибридизације. Међутим, обично са великим фрагмент сонде понављања изазива велику позадину флуоресценције, користећи необележен нуклеинских киселина преси Претходна обрада на сајтовима обавезујуће и неспецифични инхибиције неспецифичног хибридизације може да се користи за превазилажење наведених проблема, али и омогућава истраживачима да прошири открије циљ, да постигне читав бојење хромозома. РИБА техника у анализи цитогенетском у хромозому стога је знатно побољшана. Нпр компаративним геномске хибридизације (Цомпаративегеномиц хибридизација) се користи за детекцију и брисање дуплирања хромозомских региона. Када велики фрагмент сонда и узорак ће формирати неспецифичну обавезујући, сигнал за детекцију гена на хромозому забуне, потребно је да исећи на мале фрагменте <200 нуклеотида. Сада побољшане методе откривања и софтвер за откривање чини РИБА техника наставља да се развија све више захтевају ниску осетљивост детекције је у порасту. Прецизан компјутерски алгоритми за обраду слике да наставе да унапређују стварање субмицросцопиц сонда нивоа високе резолуције технике. Уз откривање мета мањи и мањи, РИБА техника се користи тајни нуклеарни субтеломериц преуређење гена и хромозома мапирања и тачније откривање једним копија иРНК.

РИБА Опсег детекције проширење, чинећи примену РИБА технике у брз раст 1990. Је формиран применом технологије ФИСХ да постигне све већи гране разних врста откривених локуса истовремено. Први је употреба великог броја различитих флуоресцентном детекцијом увек показује, као што су две боје флуоресценције за детекцију специфичних низове нуклеинске киселине, сваки хромозом, ген или транскрипција производи су тада направљене од флуоресцентног сигнала може да се реши да представља. Након декодирања шема је употреба две боје РИБЕ додатно проширити спектар примене. Декодирање програм је углавном за пропорције боје, односно, свака боја у односу на укупан број боја да опише више локација. Свака од наведених метода, или комбинацијом оба приступа треба да се детектује до 12 локуса. Обојена коришћењем компјутерски програм може да детектује превођења свих људских хромозома представљају више лоци открио РИБА прекретницу. Иако можете да користите различите методе посматраних иРНК, али цео транскрипт РИБА анализа изгледа да више ин-ситу апликације. Боја технику спроведено је на цела организација је откривена.


Претходна 1 Следећи Изаберите Странице
Корисник Преглед
Но цомментс иет
Ја желим да коментаришем [Посетилац (44.204.*.*) | Пријава ]

Језик :
| Проверите код :


Претражи

版权申明 | 隐私权政策 | Ауторско право @2018 Свет енциклопедијско знање