| Језик : |
|
| Енциклопедија заједница |Енциклопедија Одговори |Пошаљи питање |Речник Знање |Додај знања |
РНК вируси |
 |
|
Припрему реагенаса 1, ТРОзло реагенс, хлороформ, 75% етанол (0.1% ДЕПЦ припрема). 2, пластичне справе потребно 0,1% ДЕПЦ потапање у воду. 3, 0,1% ДЕПЦ воде: 100мл дд додаје у воду ДЕПЦ0.1мл, темељно уздрмана, 37 ℃ инкубација дуже од 12х, 121 ℃ аутоклава 20мин, у 4 ℃.Поступак 1, узорак руковање (1) :50-100мг ткива организација додавањем 1мл ТРОзло реагенсе. (2) ћелија монослоја: Додајте ТРОзло реагенси 1мл/цм2 таблета. (3) суспензија ћелија: ћелије су пре третмана опрати да би се спречило пропадање РНК. 5-10 × 105 за животиње, биљке или квасца ћелији или 1 × 107 бактерија додати 1 мл ТРОзло реагенаса. 2, узорак је дозвољено да стоје 15-30 ℃ 5мин, нуцлеопротеин потпуно раздвојити. 3, додајући 0.2мл (1 мл ТРОзло реагенс) хлороформ, покривају чврсто, протресите енергично за 15с и у пуној 15-30 ℃ стојећем 2-3мин. 4, на 2-8 ℃ 12000г центрифугирање 15мин. Стратификовани узорак након центрифугирања, горњи водена фаза садржи РНК, ниже органске фазе која садржи протеине и ДНК. 5, плута, додајте 0.5мл изопропанол, лагано измешати, износи 15-30 ℃ за 10мин, ће се појавити на дну епрувете желатинозне талога је РНК. 6, на 2-8 ℃ 12000г супернатанта одбацују после центрифугирања 10мин. 7, талог је додат 1 мл 75% етанола и лагано мешајте. 8, на 2-8 ℃ 7500г плута након центрифугирања 5мин 9, РНК узорак да се осуши (не потпуно сув), додати количину воде раствореног у ДЕПЦ (доступан на 55-60 ℃ раствара 10мин). Проблема пажње 1, пре додавања хлороформ (корак 1), узорак може бити -60 - 70 ℃ за најмање месец дана. 2, РНК талог (корак 6) у 75% етанолу на 2-8 ℃ се чувају најмање недељу дана, на -5 - 20 ℃ се чувају најмање годину дана. Четири, РНК квантификација РНК (мг / мл) = 40 × × ОД260 разблаживање фактор (н) / 1000 РНК чиста ОД260/ОД280 = 2.0 РНК електрофореза (1) са 1 × Тае агарозном гел електрофореза бафер производња, плус 1 × Тае електрофореза бафер да покрије површину гел. (2) У чистом клупи, укупно РНК узорак пипете 4μл Мембрана. На клупи затим додати 5μл 1 × ТАЕ електрофорезе бафер и 1μл од 10 × учитавање бафер, микс, пажљиво додајте бунаре. (3) Укључите прекидач, подесите напон до 100В, РНК од аноде до катоде електрофорезе, око 30мин након ЕБ су бојени гела у 5мин, испрати водом благо. Пренос у УВ детектор за посматрање РНК електрофорезе. [1] Монтажа и пуштање Новосинтетисаних вирусних нуклеинских киселина и вирусне структурних протеина у инфицираним ћелијама да формирају честице вируса се зове скупштина (скупштина), и прешао из ћелија у процесу за ослобађање екстрацелуларни (Релеасе). Већина ДНК вируси реплицирају у једру ДНК, синтезу протеина у цитоплазми, у зрелости језгра скупштине. Вакцинија вирус и све његове компоненте су окупљени у цитоплазми комплетан. РНК вируси копирају у цитоплазми и више нуклеинске киселине и синтезу протеина. 6 сати након инфекције, ћелија може да произведе до 10.000 вирусних честица. Након ослобађање зрелог метода вируса Скупштине су: аналитички ⑴ ћелије домаћина, вирус пуштен у окружењу, види у не-обавијен вируса, као што су аденовирусима полио вирус ⑵ пупољка начин да се ослободи, видели обавијен вируса, као што су херпес вируса добијених на нуклеарној мембрани мембране везикуле, вирус инфлуенце у ћелијске мембране да се опкољени и зрео, а затим отпустите зрео вирус пупољка. Може се спајају ћелије мост суседне ћелије или ћелије. |
| Корисник Преглед |
|
Но цомментс иет |
